磷脂酰膽堿的檢測方法有高效液相色譜 法、鉬藍比色法、薄層色譜法、核磁共振 法等。鉬藍比色法檢測的是總磷脂含量,薄層色 譜法進行的是半定量分析且干擾因素較多,核磁共 振法會對磷脂分子造成破壞,檢測成本高,存在一 定的局限性。與這些方法相比,高效液相色譜法同 時兼具操作簡單、不會破壞磷脂分子等優(yōu)點,近年 來在檢測磷脂酰膽堿方面應(yīng)用得較為廣泛。Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀(安捷 倫 科 技 有 限 公 司 ) ; SHISEIDO CAPCELL PAK UG80 氨基柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm);FA2204C 電子天平(上海天美天平儀器有限公司);TGL-16 型冷凍離心機(四川蜀科儀器有限公司);RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);DZF-6020 型 真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)。
流速越大, 磷脂酰膽堿出峰時間越早,考慮到分離效果與溶劑 消耗,最終確定流量為 0.8 mL/min。磷脂酰膽堿保留時間集中在 9~40 min 之間, 本實驗條件下磷脂酰膽堿的保留時間更短,檢測更 加快速。采用外標(biāo)法檢測回收率。選擇已知濃度的提取 物樣品溶液,向其中加入一定量標(biāo)準(zhǔn)工作液,制成 低、中、高三種濃度加標(biāo)回收樣品。按 50 μL 進樣 量進樣,平行測定 3 次,根據(jù)結(jié)果計算磷脂酰膽堿 的回收率及其 RSD 值。以 乙腈-水二元體系作為流動相,操作簡單便捷;磷脂 酰膽堿的保留時間在 6 min 內(nèi),縮短了磷脂酰膽堿 的保留時間,檢測效率高。本實驗結(jié)果可豐富卵磷 脂中磷脂酰膽堿的檢測方法,為磷脂酰膽堿的高效 檢測提供參考。